Эндогенщики

Экспериментально вызванные сдвиги в сродстве гемоглобина с кислородом. Действие инозина, пирувата и фосфата на сродство гемоглобин-кислород у обезьян Резусов in vivo.

В попытке выполнить in vivo изменения сродства гемоглобина к кислороду фармакологическими средствами, обезьянам Резусам вливали раствор 0.1 М 20 мл/кг инозина, пирувата и двунатрия фосфата. Контрольная группа получала равные объемы изотонического физиологического раствора. Обезьяны, получившие смесь инозина-пирувата-фосфата, демонстрировали среднее повышение P50 от 33.5 до 36.1 мм рт. ст. и увеличение в среднем уровней 2,3-ДФГ эритроцитов от 5.1 до 7.6 µmoles/ml RBC. Изменения были максимальны спустя 6 часов после вливаний, оставались повышенными в течение 24 часов, и затем постепенно возвращались к нормальному за 4-дневный период. Один инозин или пируват совместно с фосфатом были не в состоянии произвести те же самые результаты. Эти сведения указывают, что внутривенное введение инозина, пирувата и фосфата может изменить сродство кислорода in vivo, и может иметь значение в болезнях, связанных с низкой поставкой кислорода к тканям.

http://www.bloodjournal.org/cgi/content ... type=HWCIT

Оригинал:

Experimentally Induced Alterations in Affinity of Hemoglobin for Oxygen. II. In Vivo Effect of Inosine, Pyruvate, and Phosphate on Oxygen-Hemoglobin Affinity in Rhesus Monkey
Harvey J. Sugerman 1, Thomas W. Pollock 1, Ernest F. Rosato 1, Maria Delivoria-Papadopoulos 1, Leonard D. Miller 1, and Frank A. Oski 1
1 Departments of Surgery and Pediatrics, University of Pennsylvania School of Medicine and the Hospital of the University of Pennsylvania, and the Department of Physiology, Graduate Division of the University of Pennsylvania School of Medicine Philadelphia, Pa.

In an attempt to produce in vivo alterations in the affinity of hemoglobin for oxygen by pharmacologic means, rhesus monkeys were infused with 20 ml/kg of a 0.1 M solution of inosine, pyruvate, and bisodium phosphate. Control monkeys received equal volumes of isotonic saline. The monkeys given the inosine-pyruvate-phosphate mixture demonstrated a mean rise in P50 from 33.5 to 36.1 mm Hg and an increase in mean red cell 2, 3-diphosphoglycerate levels from 5.1 to 7.6 µmoles/ml RBC. The changes were maximal 6 hr postinfusion, remained elevated for 24 hr, and then gradually returned to normal over a 4-day period. Inosine alone, or pyruvate and phosphate together failed to produce the same results. This finding indicates that intravenous administration of inosine, pyruvate and phosphate can alter oxygen affinity in vivo and may be of value in diseases associated with poor oxygen delivery to tissues.

Submitted on May 18, 1971
Revised on June 26, 1971
Accepted on July 27, 1971

Повышение уровней аденозина трифосфата в человеческих эритроцитах

Предварительно было возможно удвоить уровень АТФ в человеческих эритроцитах при 37° инкубации клеток в течение 10 часов с глюкозой и аденином. Настоящее исследование описывает дальнейшее увеличение уровня АТФ и некоторые из возможных вовлечённых механизмов. Добавление 5 мм пирувата к среде, содержащей 32 mM неорганического фосфата, глюкозы и аденина, троекратно повысило уровень АТФ в течение 10-ти часовой инкубации. Пируват мог быть заменен инозином, но присутствие обоих ограничивало повышение АТФ в два раза по сравнению со свежими клетками. Это ограничение может быть преодолено с помощью 96 mM фосфата в инкубационной среде. В этом случае внутриклеточный уровень АТФ утраивался в течение 2 часов. Условия, которые ограничивают накопление АТФ, связаны с низкими внутриклеточными концентрациями фосфата и накоплением органических фосфатов, особенно, в присутствии инозина и 2,3-ДФГ. Использование [14] C-глюкозы, меченной в углероде 1, 2, или 6, показало, что, когда АТФ быстро возросло, часть пентозы нуклеотидов аденина главным образом снабжённой (примерно 80 %) окислением углерода 1 глюкозы, катализировано дегидрогеназами шунта гексозамонофосфата (большое сомнение в точном переводе - Sergio). В присутствии пирувата эта активность удваивалась. Пируват восстанавливает NADPH, образованный этим путём, так как молочная дегидрогеназа имеет некоторую специфику по отношению к NADPH. Вовлечение дегидрогеназ шунта гексозамонофосфата иллюструется при помощи недостатка эритоцитов в глюкоза-6-фосфат дегидрогеназе. Инкубация этих клеток в течение 5 часов с глюкозой и аденином приводит только к небольшому увеличению в формировании АТФ, а пируват не имеет никакого дополнительного эффекта. Добавление инозина, однако, ведёт к тому же самому приращению в уровнях АТФ, наблюдаемых в нормальных клетках. Уровни АТФ и 2,3-ДФГ в 6-wk сохраненной крови могут также быть увеличены в три раза по сравнению со свежими клетками при инкубации с глюкозой, аденином, пируватом и инозином в среде с высоким содержанием (сомнение в точном переводе - Sergio) в неорганическом фосфате.

Оригинал реферата:

Blood, 1973, Vol. 42, No. 4, pp. 637-648.
© 1973 American Society of Hematology, Inc.

The Elevation of Adenosine-Triphosphate Levels in Human Erythrocytes
Elizabeth M. Warrendorf 1 and David Rubinstein 1
1 Department of Biochemistry, McGill University, Montreal, Quebec, Canada.

It has previously been possible to double the level of ATP in human erythrocytes by incubation of the cells at 37° for 10 hr with glucose and adenine. The present study describes a further increase in the ATP level and some of the possible mechanisms involved. Addition of 5 mM pyruvate to a medium containing 32 mM inorganic phosphate, glucose, and adenine elevated the level of ATP threefold during a 10-hr incubation. Pyruvate could be replaced by inosine but the presence of both limited the elevation of ATP to twice that of fresh cells. This limitation may be overcome by the use of 96 mM phosphate in the incubation medium, in which case the intracellular level of ATP is tripled within 2 hr. The conditions which limit the accumulation of ATP are associated with low intracellular phosphate concentrations and the accumulation of organic phosphates, especially, in the presence of inosine, 2,3-diphosphoglycerate. Utilizing 14C-glucose labeled in carbons 1, 2, or 6, it has been shown that when ATP is being rapidly elevated, the pentose moiety of the adenine nucleotides is mainly supplied (about 80%) by oxidation of carbon 1 of glucose, catalyzed by the dehydrogenases of the hexosemonophosphate shunt. In the presence of pyruvate this activity is doubled. Pyruvate reoxidizes NADPH formed by this pathway, since lactic dehydrogenase has some specificity towards the NADPH. The involvement of the dehydrogenases of the hexosemonophosphate shunt is illustrated by the use of erythrocytes deficient in glucose-6-phosphate dehydrogenase. Incubation of these cells for 5 hr with glucose and adenine results in only a slight increase in ATP formation, and pyruvate has no additional effect. Addition of inosine, however, leads to the same increment in ATP levels seen in normal cells. The ATP and 2,3-diphosphoglycerate levels in 6-wk preserved blood can also be increased to three times that of fresh cells by incubation with glucose, adenine, pyruvate, and inosine in a medium high in inorganic phosphate.

Submitted on January 26, 1973
Revised on March 27, 1973
Accepted on March 28, 1973

http://www.bloodjournal.org/cgi/content ... type=HWCIT

Полный текст статьи:
http://www.bloodjournal.org/cgi/reprint ... type=HWCIT